Lưu trữ tế bào gốc răng sữa: quy trình thực hiện và kiểm soát chất lượng mẫu
1. Lưu trữ tế bào gốc răng sữa
Tế bào gốc răng sữa được lấy từ tủy của răng sữa rụng tự nhiên ở trẻ em, có khả năng tự tái tạo và biệt hóa thành nhiều loại tế bào khác nhau trong cơ thể. Tế bào gốc từ răng sữa (Stem Cell from Human Exfoliated Deciduous Teeth – SHED) mang các đặc điểm tương tự tế bào gốc trung mô từ tủy xương, mô mỡ, dây rốn, đồng thời có một số lợi thế như thu thập mẫu không xâm lấn, tốc độ tăng sinh nhanh, khả năng biệt hóa mạnh mẽ, đặc biệt là biệt hóa thần kinh và xương. Vì vậy, việc lưu trữ tế bào gốc tủy răng sữa mang lại hy vọng ứng dụng điều trị các bệnh lý cho tương lai của trẻ.
Ngoài răng sữa, các loại tế bào gốc nha khoa khác cũng được quan tâm trong các nghiên cứu, thử nghiệm lâm sàng và lưu trữ như tế bào gốc từ tủy răng trưởng thành (Dental Pulp Stem Cell – DPSC), tế bào gốc dây chằng nha chu (Periodontal Ligament Stem Cell – PDLSC), tế bào gốc nhú đỉnh (Stem Cell from Apical Papilla – SCAP),…

Trên thế giới, nhiều ngân hàng đã hoạt động lưu trữ các loại tế bào gốc nha khoa (chủ yếu là SHED và DPSC) như BioEden (Hoa Kỳ), Future Health (Anh), Dentcell (Mexico), Mothercell (Ấn Độ),… Ở Việt Nam, lĩnh vực này cũng được quan tâm trong vài năm trở lại đây, tiêu biểu là Ngân hàng mô thuộc Hệ thống Y tế Vinmec, Ngân hàng mô Fbiomed VN.
2. Quy trình thực hiện

2.1. Thu thập mẫu
- Sàng lọc mẫu: Người hiến được thực hiện các xét nghiệm để sàng lọc ban đầu nguy cơ nhiễm khuẩn, nhiễm virus cho mẫu lưu trữ. Đồng thời, các ngân hàng sinh học cũng đưa ra những tiêu chuẩn lựa chọn và tiêu chuẩn loại trừ để đảm bảo chất lượng tốt nhất.
- Thu thập mẫu: Người hiến cần được vệ sinh răng miệng, răng sau khi thu thập được đưa ngay vào dung dịch chuyên dụng để đảm bảo tủy được bảo tồn. Nhiều ngân hàng khuyến cáo cần nhổ răng ngay khi mới lung lay, nhiều ngân hàng khác chấp nhận việc để răng rụng tự nhiên.
- Vận chuyển mẫu: Dung dịch vận chuyển thường là các loại đệm như PBS hoặc HBSS, cá biệt BioEden và một số ngân hàng khuyến cáo bảo quản mẫu trong sữa bò. Thời gian vận chuyển từ khi nhổ răng đến ngân hàng lưu trữ thường từ một đêm đến 48 giờ.
2.2. Phân lập và nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc
- Việc phân lập và nuôi cấy tăng sinh tế bào gốc cần được thực hiện trong môi trường phòng sạch và có tủ an toàn sinh học cấp II
- Mẫu răng được vệ sinh, tiếp cận mô (tủy răng) và phân lập tế bào gốc, sau đó nuôi cấy tăng sinh để nhân lên số lượng lớn
- Quy trình phân lập và nuôi cấy tăng sinh cần đảm bảo “…quá trình xử lý không làm thay đổi các đặc điểm sinh học liên quan của tế bào hoặc mô”
2.3. Kiểm soát chất lượng tế bào gốc
- Định danh tế bào: SHED hay DPSC cần thể hiện các đặc điểm cơ bản của tế bào gốc trung mô, bao gồm (i) bám dính trên bề mặt đĩa nuôi cấy nhựa và thể hiện hình thái đặc trưng; (ii) biểu hiện các dấu ấn bề mặt đặc trưng, bao gồm tỷ lệ dương tính CD105, CD73 và CD90 đạt trên 95%, tỷ lệ dương tính CD45, CD34, CD14 hoặc CD11b, CD79α hoặc CD19 và HLA‐DR không quá 2%; (iii) có khả năng biệt hóa ba dòng, gồm dòng tạo xương, tạo mỡ, tạo sụn.
- Tỷ lệ tế bào sống: Tỷ lệ ngày trước lưu trữ thường yêu cầu ở mức 80-100%
- Độ tinh sạch: Không nhiễm vi khuẩn, vi nấm, mycoplasma, virus
- Tính xác thực: Cần đảm bảo loại trừ các yếu tố định danh mẫu sai như nhiễm chéo, thay đổi vị trí hoặc dán nhãn sai, một số đơn vị như Cơ quan Dược phẩm Châu Âu (European Medicines Agency, EMA) yêu cầu xét nghiệm trình tự DNA lặp lại ngắn (Short Tandem Repeat – STR) để đảm bảo định danh mẫu chính xác khi xuất mẫu.
- Sự ổn định di truyền: Các mẫu SHED và DPSC cần thời gian nuôi cấy và số lần cấy chuyển tối thiểu để duy trì tính ổn định di truyền, và cần có phương pháp đánh giá thích hợp
2.4. Bảo quản đông lạnh tế bào gốc
- Mẫu tế bào gốc được hạ lạnh từ nhiệt độ phòng về nhiệt độ phù hợp (khoảng -80oC đến -90oC) và lưu trữ trong nitơ pha lỏng (-196oC) hoặc pha hơi (<-135oC)
-Môi trường bảo quản đông lạnh chứa các chất bảo quản đông lạnh như dimethyl sulfoxide (DMSO), propylene glycerol, polyvinylpyrrolidone,… để ức chế sự phát triển của tinh thể băng, vốn có thể phá vỡ màng tế bào làm tế bào bị vỡ
- Một số ngân hàng thực hiện đông lạnh toàn bộ răng hoặc mô răng, nhưng gặp nhiều hạn chế kỹ thuật liên quan khả năng tách tế bào gốc sau rã đông và ứng dụng lâm sàng
2.5. Kiểm soát chất lượng trong quá trình lưu trữ
- Để đánh giá chất lượng của ngân hàng sinh học, kiểm soát chất lượng sau khi rã đông phải là một phần của quy trình ngân hàng và phải được thực hiện trên một ống mẫu đông lạnh, vài tháng sau khi bảo quản lạnh
- Các tiêu chí kiểm soát chất lượng sau khi rã đông mẫu bao gồm: tỷ lệ tế bào sống, định danh tế bào (hình thái, biểu hiện dấu ấn bề mặt, biệt hóa ba dòng)

3. Chuẩn hóa và chứng nhận ngân hàng tế bào gốc răng sữa
- Các ngân hàng cần được kiểm tra, đánh giá và chứng nhận bởi các cơ quan có thẩm quyền trước khi hoạt động, bao gồm các quy trình vận hành dịch vụ, quy trình kỹ thuật, quản lý rủi ro,…
- Từng mẫu lưu trữ cần được lập hồ sơ và kiểm soát thông tin, sẵn sàng cung cấp cho các cơ quan có thẩm quyền để kiểm tra, giám sát
---------
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Zeitlin B. D. (2020). Banking on teeth–Stem cells and the dental office. Biomedical journal, 43(2), 124-133. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bj.2020.02.003
2. Khaseb S., et al. (2021). Dental stem cell banking: Techniques and protocols. Cell Biology International, 45(9), 1851-1865. DOI: https://doi.org/10.1002/cbin.11626
---------
Xem thêm:
- Tế bào gốc từ tủy răng sữa (SHED) https://www.facebook.com/share/p/1BP5PSofdN/
- Các loại tế bào gốc nha khoa (Dental Stem Cell): nguồn thu nhận và tiềm năng ứng dụng của chúng https://www.facebook.com/share/p/1ECtP4ZEJL/
- Bảo quản đông lạnh tế bào https://www.facebook.com/share/p/17JcfUqhPr/
- Quy định về sàng lọc người hiến mẫu để tạo ra sản phẩm Liệu pháp tế bào tại châu Âu và Hoa Kỳ https://www.facebook.com/share/p/19rgLDAJ5a/
- ISCT nói gì và quy ước thế nào về tế bào gốc trung mô (MSC) https://www.facebook.com/share/p/16o3QTekg3/
- Tạp nhiễm trong quá trình nuôi cấy tế bào https://www.facebook.com/share/p/1GQEu8Wy1j/, xét nghiệm vi sinh vật https://www.facebook.com/share/p/1JWHDAoQpZ/ và xét nghiệm mycoplasma https://www.facebook.com/share/p/177NXXa4Ax/